Monoklonaler Anti-Aktin-Antikörper , α-Glattmuskel

Actine sind Proteine des Zytoskeletts, die die Zellmotilität regulieren. Mehrere Gerüst-, Signal- und actinbindende Proteine regulieren die gegenseitige Umwandlung von filamentösen F-Actinen und monomeren G-Actinen. Zelluläre Actine verschiedener Spezies weisen sehr ähnliche immunologische und physikalische Eigenschaften auf. Der Einsatz monoklonaler Antikörper stellt daher ein spezifisches und nützliches Hilfsmittel zur Untersuchung der Lokalisierung, Struktur und Funktion von Actin-Proteinen bereit. Actin 2 (ACTA2), das Glattmuskelactin, ist auf dem humanen Chromosom 10q23.31 codiert.
Der monoklonale Anti-α-Glattmuskelactin-Antikörper der Maus bindet an Actin der Spezies Mensch, Maus, Ratte, Rind, Huhn, Frosch, Ziege, Meerschweinchen, Kaninchen, Hund, Schaf und Schlange.
Der monoklonale Anti-α-Glattmuskelactin-Antikörper (Maus-IgG2a-Isotyp) stammt aus dem Hybridom, das durch die Fusion von Maus-Myelomzellen und Milzzellen einer immunisierten Maus hergestellt wurde. Das NH2-terminale synthetische Decapeptid α-Glattmuskelactin, gekoppelt an Schlitzschnecken-Hämocyanin (HLH), wurde als Immunogen verwendet. Der Isotyp wird mit dem Sigma ImmunotypeTM Kit (Sigma Warennr. ISO-1) und einem Doppeldiffusions-Immunoassay unter Anwendung von monoklonalen Mausantikörper-Isotypisierungsreagenzien (Sigma Warennr. ISO-2) bestimmt.

Der Antikörper (auch als Anti-α-Sm-1 bekannt) ist spezifisch für die α-Isoform des Glattmuskelaktins. Er reagiert spezifisch mit α-Glattmuskelaktin in Immunblotting-Assays und markiert glatte Muskelzellen in gefrorenen oder Formalin-fixierten Paraffin-eingebetteten Gewebeschnitten.

Der monoklonale Anti-α-Glattmuskelactin-Antikörper ist spezifisch für die Isoform α-Actin. Er reagiert spezifisch mit α-Glattmuskelactin unter Anwendung von Immunblots und indirekter Immunfluoreszenzmarkierung von Formalin-fixierten Paraffinschnitten oder gefrorenen Gewebeschnitten. Der Antikörper kann zur immunzytochemischen Lokalisierung des α-Glattmuskelactins mittels Immunperoxidase-, Immunfluoreszenz-, ELISA- oder Immunblot-Methoden eingesetzt werden. Der Antikörper reagiert mit den Spezies Mensch, Maus, Ratte, Rind, Huhn, Frosch, Ziege, Meerschweinchen, Kaninchen, Hund, Schaf und Schlange.

N-terminales synthetisches Decapeptid von α-Glattmuskelaktin.

Der monoklonale Anti-α-Glattmuskelactin-Antikörper wird für Western-Blot-Assays unter Anwendung ganzer Nierenhomogenate in humanen anaplastischen Schilddrüsenkrebszellen eingesetzt. Das Produkt wird außerdem für immunhistochemische Assays unter Anwendung von Mausgewebeschnitten in Leberschnitten und Uterusschnitten eingesetzt.
Der monoklonale Anti-α-Glattmuskelactin-Antikörper wird zum Nachweis von Actin 2 in Brustfibroblasten mittels Immunfluoreszenzfärbung eingesetzt.

Glatte Muskelzellen boviner Aorten werden unter Verwendung des monoklonalen Anti-ACTA2-Antikörpers immunzytochemisch untersucht. Die Zellen werden zunächst auf Deckgläsern gezüchtet und 10 Minuten bei 4 Grad in 50 % Aceton/EtOH fixiert.

Paraffinschnitte von Rattenhoden-Gewebetransplantaten werden immunhistochemisch mit monoklonalen Maus-Antikörpern gegen Glattmuskelaktin gefärbt.
Zur Identifizierung von Myofibroblasten wird X-Gal-gefärbtes Maus-Herzgewebe unter Anwendung des monoklonalen Maus-Primärantikörpers gegen Glattmuskelaktin immunhistochemisch untersucht.

Actin ist eines der am stärksten konservierten eukaryotischen Proteine und wird in Säugetieren und Vögeln in sechs Isoformen exprimiert, die durch Elektrophorese und Aminosäuresequenzanalyse charakterisiert werden. Vier der sechs Isoformen sind die Differenzierungsmarker von Muskelgewebe. Die Actinisoformen weisen insgesamt >90 % Sequenzhomologie auf, zeigen aber nur 50–60 % Homologie in ihren NH2-terminalen Resten. Die NH2-terminale Actinregion scheint eine Haupt-Antigenregion zu sein und ist möglicherweise an der Interaktion von Actin mit anderen Proteinen wie Myosin beteiligt. Es wurde gezeigt, dass das relative Verhältnis von Actinisoformen in der Glattmuskulatur verschiedener Organe unterschiedlich ist und sich innerhalb der gleichen Population von Glattmuskelzellen während der Entwicklung, in pathologischen Situationen und unter unterschiedlichen Kulturbedingungen verändert.
Alpha-Actin-2-Mutationen werden mit Funktionsstörungen der glatten Muskeln in Arterien assoziiert und mit koronarer Herzkrankheit in Verbindung gebracht. Mutationen auf ACTA2 tragen zur Dissektion und Erweiterung der Aorta bei thorakalen Aortenaneurysmen (TAAD) bei.

Der Antikörper wird als Aszitesflüssigkeit mit 15 mM Natriumazid als Konservierungsmittel geliefert.

Für regelmäßige Verwendung bei 2-8 °C bis zu 1 Monat aufbewahren. Zur langfristigen Aufbewahrung kann die Lösung in Arbeitsaliquoten eingefroren werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen wird nicht empfohlen. Falls nach längerer Lagerung eine leichte Trübung eingetreten ist, die Lösung vor Gebrauch durch Zentrifugieren klären.

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