KAPA2G Fast Genotypisierungsmix

Der KAPA2G Fast Genotypisierungsmix (2X) ist ein gebrauchsfertiger Master-Mix, der alle erforderlichen Komponenten für eine schnelle Polymerase-Kettenreaktion (PCR) enthält, jedoch ohne Primer und Template. Darüber hinaus enthält der ReadyMix^™ zwei inerte Farbstoffe, welche die Analyse von PCR-Reaktionsprodukte durch eine Agarosegel-Elektrophorese ermöglichen, ohne dass eine DNA-Ladelösung zugegeben werden muss. Das KAPA Express Extract System enthält eine für eine schnelle Probenlyse entwickelte thermostabile Protease. Das KAPA Express Extract, ein neues thermostabiles Protease- und Puffersystem, ermöglicht die Extraktion von PCR-bereiter DNA aus Mausgewebe in nur 15 Minuten sowie von KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff, der eine DNA-Polymerase enthält, die durch gerichtete Evolution für hohe Verarbeitbarkeit und Geschwindigkeit optimiert wurde. Die Kombination von KAPA Express Extract und KAPA2G Fast Genotypisierungsmix ermöglicht eine zuverlässige Extraktion und Amplifikation von DNA-Fragmenten aus Mausgewebe in nur 1 Stunde, während konventionelle Protokolle ≥1 Tag dafür beanspruchen.

KAPA2G Fast Genotypisierungsmix wird für folgende Anwendungen eingesetzt:

• Extraktion und Amplifikation aus murinem Schwanz-, Ohren- und Zehengewebe
• Extraktion und Amplifikation von DNA aus anderen Tiergeweben und Hybridomen
• Verwendung in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR)

Mit KAPA Express Extract extrahierte DNA wird mit dem KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff verstärkt. Durch KAPA2G Fast Genotypisierungsmix erzeugte DNA-Fragmente haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden. Sie können außerdem für nachgelagerte Routineanalysen oder -anwendungen eingesetzt werden, wie u. a. beim Restriktionsenzymverdau sowie bei der Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivitäten, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ eingebauten Nukleotiden. Die Lyse wird in einem Thermocycler, Heizblock oder Wasserbad durchgeführt; anschließend wird die Probe zentrifugiert, um den DNA-haltigen Überstand zurückzugewinnen. Daraufhin wird der Überstand um das 10-fache verdünnt, bevor er als Template in der PCR verwendet wird. Im Gegensatz zu vorhandenen Protokollen, die sich auf den Proteinase-K-Verdau stützen, erfolgen mit KAPA Express Extract durchgeführte Extraktionen in einem einzigen Röhrchen, ohne dass gefährliche Chemikalien oder mehrere Waschschritte erforderlich sind. Dadurch wird das Risiko von Probenverlusten oder Kontaminationen erheblich reduziert. Der Prozess ergibt ein ausreichendes Template für mehrere Assays und kann problemlos für Proben in einem 96-Well-Format skaliert werden. Bei jeder Extraktion wird ein ausreichendes Template für mindestens 100 Genotypisierungen mittels PCR-Reaktionen erzeugt. Verdünnte oder unverdünnte Extrakte sind bei -15 °C bis -25 °C mindestens 6 Monate lang stabil.

Alle Komponenten der KAPA Maus-Genotypisierungskits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur aufbewahrt wird.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC