Anti-Aktin-Antikörper, Klon C4

Aktine sind ubiquitäre eukaryotische Proteine, die als multifunktionale Grundbausteine zytoskelettaler Mikrofilamente dienen. Sie spielen eine wichtige Rolle in einer Vielzahl von Zellprozessen wie der Zellteilung, Zellmigration, Chromatinremodellierung, transkriptionellen Regulation und dem vesikulären Transport. Diese Funktionen sind auf ihre Fähigkeit zur Bildung von Filamenten zurückzuführen, die sich je nach den Bedürfnissen der Zelle schnell zusammenschließen und voneinander lösen können. Bei Säugetieren wurden mindestens sechs verschiedene Aktintypen beschrieben. Obwohl Aktine insgesamt etwa 90 % Sequenzhomologie aufweisen, zeigen die Isoformen keine räumlichen, zeitlichen und gewebespezifischen Expressionsmuster und nur 50–60 % Homologie in ihren 18 N-terminalen Resten. Beta- und Gamma-Aktine, auch als zytoplasmatische Aktine bekannt, sind in höheren Tierarten hochkonserviert und werden überwiegend in Nicht-Muskelzellen exprimiert, wo sie die Zellstruktur kontrollieren. Exozytose und Motilität. Sie sind fast identische Proteine, die sich nur in vier Aminosäuren in der N-terminalen Region unterscheiden. Die anderen vier Aktin-Isoformen sind normalerweise in spezifischen Arten von adultem Muskelgewebe vorzufinden. Alpha-Herzmuskel- und Alpha-Skelettmuskel-Aktine werden in den quergestreiften Herz- bzw. Skelettmuskeln exprimiert. Alpha- und Gamma-Aktine sind vorwiegend in der glatten Gefäßmuskulatur bzw. der glatten enterischen Muskulatur anzutreffen. Es wurde nachgewiesen, dass an Calcium gebundenes Beta-Aktin ein dynamischeres Verhalten zeigt als an Calcium gebundenes Gamma-Aktin und die Polymerisations- und Depolymerisationsrate steigt. Zudem können Beta- und Gamma-Aktine leicht copolymerisieren und die daraus resultierenden Filamente weisen Polymerisations- und Depolymerisationsraten auf, die in Abhängigkeit vom Verhältnis von Beta- zu Gamma-Aktin variieren (Lessard, J. L., et al., 1988). Cell Motility and the Cytoskeleton 10(3); 349–362.

Alle Tierarten und Zelltypen mit einer Aktinform reagieren mit indirekter Immunfluoreszenz oder Immunblot, auch pflanzliches Aktin.

MAB1501R ist ein Pan-Aktin-Antikörper, der in einer hoch konservierten Region des Aktins an ein Epitop bindet. Deshalb reagiert dieser Antikörper mit allen sechs Isoformen von Wirbeltier-Aktin (Lessard, 1988). Reagiert sowohl mit globulären (G) als auch mit filamentösen (F) Formen von Aktin und beeinträchtigt nicht die Aktinpolymerisation zur Bildung von Filamenten mit einem Verhältnis von einem Antikörper pro zwei Aktinmonomeren. Dieser Antikörper erhöht jedoch den Grad der Polymerisation, wenn er in einem niedrigeren Verhältnis von Antikörper zu Aktin verwendet wird. Neben der Markierung von Myotuben färbt Anti-Aktin Myoblasten und Fibroblasten. Obwohl der Klon C4 als Antikörper für Aktin aus dem Kaumagen von Hühnern hergestellt wird, reagiert er mit Aktinen aller Wirbeltiere sowie mit Aktinen von Dictyostelium discoideum und Physarum polycephalum (Lessard, 1988).

Dieser Anti-Aktin-Antikörper, Klon C4, ist zur Verwendung bei ELISA, IC, IH, IH(P) und WB für den Nachweis von Aktin validiert und wurde bereits mehr als 70 Mal in der Fachliteratur erwähnt.

Immunzytochemie:
Eine Verdünnung von 10 μg/mL einer früheren Charge wurde verwendet (Methanol-fixierte 3T3-Zellen der Maus).

Immunhistochemie:
Eine Verdünnung von 10μg/mL einer früheren Charge wurde für Paraffinschnitte verwendet, die mit 4 % Formaldehyd, 3 % Glutaraldehyd und Natriumcacodylat behandelt wurden (siehe Luciano, L et al. 2003).

ELISA:
Eine frühere Charge erwies sich als stark reaktiv mit zytoplasmatischem Aktin und zeigt eine deutliche Bindung an Aktine des Kaumagens, des Skeletts, der Arterien und des Herzens. Zeigt zudem eine deutliche Bindung sowohl an Dictyostelium discoideum als auch an Physarum polycephalum.

Western Blot:
1–20 µg/mL. Mit Muskelhomogenaten unter Anwendung von SDS-PAGE; reagiert relativ einheitlich mit Präsenz eines 43-kD-Proteins im Skelett-, Herz-, Kaumagen- und Aortagewebe. Scheint mit allen in diesen Präparaten gefundenen Isoformen von Aktin zu reagieren und zeigt eine starke Reaktion mit dem Alpha-Aktin in der Skelett-, Herz- und Arterienmuskulatur (Otey, 1987).

Immunhistochemie:
10 µg/mL für Paraffinschnitte, die mit 4 % Formaldehyd, 3 % Glutaraldehyd und Natriumcacodylat behandelt wurden (siehe Luciano, L et al. 2003).

Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

Regelmäßig in einem Western Blot mit HeLa-Lysat beurteilt.

Western-Blot-Analyse:
Eine 1:1.000 Verdünnung dieser Charge wies Aktin in 10 μg HeLa-Lysat nach.

43 kDa

Aufgereinigtes Protein G in 0,1 M Tris-Glycin (pH 7,4); 150 mM NaCl mit 0,05 % NaN3.

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