Pepstatin A

Pepstatin A is suitable for use:

• in the inhibitor cocktail in fluorometric matrix metalloproteinase assay
• as a protease inhibitor during homogenization of tissue
• as a protease inhibitor during extraction of cells
• to determine the molar concentrations of cathepsin D by titration with pepstatin A
• in inhibiting cathepsin D

It can be used in conjunction with E64-d and Leupeptin A to inhibit the degradation of autophagic cargo inside autophagosomes. For this application, the working concentration is typically between 1-10 μM.

Pepstatin A ist ein Inhibitor von sauren Proteasen (Aspartylpeptidasen). Mit Proteasen wie Pepsin, Renin, Cathepsin D, Chymosin des Rindes und Protease B (Aspergillus niger) bildet es einen 1:1-Komplex. Der Inhibitor ist hochgradig selektiv und hemmt nicht Thiolproteasen, neutrale Proteasen oder Serinproteasen. Auch gelöste γ-Sekretase und retrovirale Protease werden von Pepstatin A gehemmt. Es wird verwendet, um Proteasen aus verschiedenen Quellen zu charakterisieren.

1 U entspricht der Inhibitormenge, welche die Pepsinaktivität um 1 U reduziert (1 Pepsin-U entspricht der Enzymmenge, die bei 280 nm eine Extinktionszunahme von 0.001 pro Minute bei pH 2.0 und 37°C bewirkt (Haemoglobin, Fluka^®-Nr. 51290, als Substrat, Testendvolumen: 16 ml); 10′000 Extinktions-U wie oben beschrieben, entsprechen ~1 Bergmeyer-U, wenn 1-Pepsin-U der Enzymmenge entspricht, die 1 μmol Acetyl-L-phenylalanyl-3,5-diiod-L-tyrosin pro Minute bei 2.0 und 37°C hydrolysiert

Pepstatin kann mit einer Konzentration von 1 mg/ml in 10 % (v/v) Essigsäure in Methanol (9:1 Methanol:Essigsäure) aufgelöst werden. Die Zugabe von Essigsäure kann erforderlich sein, um dieses Peptid in Methanol oder DMSO aufzulösen. Die Auflösung mit einer Konzentration von 1 bis 2 mg/ml in Ethanol ist möglich, allerdings kann für eine vollständige Auflösung Wärme erforderlich sein. Pepstatin-A-Lösungen können ohne Zerfall des Peptids bis 60 °C erhitzt werden.
Stammlösungen mit einer Konzentration von 1 mg/ml sind bei 4 °C mindestens eine Woche lang stabil. Eine 1-mM-Lösung in Methanol oder DMSO ist bei -20 °C monatelang stabil. Wenn Lösungen einen dunkleren Gelbton annehmen, findet eine Hydrolyse des Reagenz statt.
Eine Arbeitskonzentration von 1 μM ist bei Raumtemperatur mindestens einen Tag lang stabil.

Strong inhibitor of acid proteases - pepsin, cathepsin D, renin