Taq DNA Polymerase, 5 U/μl

Taq DNA Polymerase ist eine hochprozessive 5′→3′ DNA-Polymerase ohne 3′→5′ Exonuklease-Aktivität. Es handelt sich um eine einzelne Polypeptidkette mit einem Molekulargewicht von etwa 95 kDa.
Taq DNA Polymerase wurde ursprünglich aus dem thermophilen Eubakterium Thermus aquaticus BM isoliert, einem Stamm, dem die Taq-I-Restriktionsendonuklease fehlt. Dieses Enzym wurde in E.coli geklont.

Taq DNA Polymerase kann für eine einfache, routinemäßige PCR verwendet werden. Die Taq DNA Polymerase von Roche Applied Science wird nach strengen Reinheits- und Qualitätsstandards hergestellt. Diese Zubereitung rekombinanter Taq DNA Polymerase kann verwendet werden für:

• PCR
• RT-PCR
• qPCR
• Andere Primer-Extensionsreaktionen wie Sequenzierung und Markierung

Zuverlässige und reproduzierbare Ergebnisse:
Hohe Konsistenz zwischen den Chargen.
Es ist nicht erforderlich, jede Charge zu testen:
Taq DNA Polymerase wird strengen Tests unterzogen.
Vermeiden von PCR-Verschleppungen
Der Einbau von dUTP in Kombination mit Uracil-DNA-Glycosylase verhindert eine PCR-Kreuzkontamination.

1 Kit mit 2 Komponenten

Routine-Assays haben mittelgroße Amplikons und einen GC-Gehalt von 50 %. Taq DNA Polymerase hat keine Heißstart- oder Korrekturlesefunktion. Sie ist bei +75 °C und einem pH-Wert von 9 optimal aktiv.
Fehlende Restriktionsendonuklease:
Dem ursprünglich aus T. aquaticus BM isolierten Enzym fehlt die Taq-I-Restriktionsendonuklease-Aktivität. Jede Charge wird mittels PCR unter Verwendung von λDNA getestet. Jede Charge wird auch gemäß den aktuellen Qualitätskontrollverfahren auf das Fehlen von Exo- und Endonukleasen sowie auf Nicking-Aktivitäten getestet.

Eine Einheit Taq DNA Polymerase ist definiert als die Enzymmenge, die innerhalb von 60 min bei +65 °C unter den oben angegebenen Assay-Bedingungen 10 nmol der gesamten Desoxyribonukleosidtriphosphate in Säure-fällbare DNA einbaut.

Assay: Inkubationspuffer:
67 mM Tris/HCl; pH 8,3/25 °C, 5 mM MgCl₂, 10 mM Mercaptoethanol, 0,2 % Polydocanol, 0,2 mg/ml Gelatine, je 0,2 mM dATP, dGTP, dTTP und 0,1 mM dCTP.

Inkubationsverfahren:
M13mp9ss, M13-Primer (17mer) und 1 μCi (α^-32P) dCTP werden mit geeigneten Verdünnungen von Taq DNA Polymerase in 50 μl Inkubationspuffer bei +65 °C für 60 Minuten inkubiert. Die Menge der eingebauten dNTPs wird durch Trichloressigsäureausfällung bestimmt.

Volumenaktivität: 5 U/μl

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

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