Proteinase K, rekombinant, PCR-tauglich

Das rekombinante Enzym ist identisch mit der nativen Protease, die ursprünglich aus dem Schimmelpilz Tritirachium album isoliert wurde. Die Spezifikationen für das rekombinante Enzym sind die gleichen wie die für die native Protease. Die Aminosäurensequenz (Molekulargewicht) und die Molekularstruktur sind identisch. Die rekombinante Zubereitung ist jedoch viel reiner als das native Enzym, da sie nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren frei von DNA und daher für die Isolation von PCR- und RT-PCR-Templates gut geeignet ist.

Proteinase K ist eine Subtilisin-verwandte Serinprotease, die keine ausgeprägte Spaltungsspezifität aufweist.
Das Enzym ist auch als Lyophilisat erhältlich.

Proteinase K spaltet Proteine zwischen den Aminosäuren X und Y (X-_↓-Y), wobei X = eine aliphatische, aromatische oder hydrophobe Aminosäure und Y = eine beliebige Aminosäure ist. Das Enzym ist bei nativen Proteinen äußerst wirksam und kann daher zur schnellen Inaktivierung endogener Nukleasen wie RNasen und DNasen eingesetzt werden.

• Auswahl eines effizienten Hilfsmittels zur Herstellung von Templates. Inaktivieren von DNasen und RNasen der meisten Spezies.
• Vertrauen Sie auf eine gleichbleibende Qualität und Leistung. Strenge Qualitätstests stellen eine optimale Stabilität und hohe Leistung von Charge zu Charge sicher.
• Bereiten Sie Proben über ein breites Zustandsspektrum vor. Das robuste Enzym ist über einen weiten pH-Bereich stabil und eignet sich ideal für verschiedene Anwendungen.
• Profitieren Sie von einem Enzym, das frei von Verunreinigungen ist. Das Enzym wird auf die Abwesenheit von RNasen und DNasen getestet und ist praktisch frei von DNA. Es ist besonders gut geeignet für die Isolation von PCR-Templates.

Dieses Präparat ist nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren frei von RNasen, DNasen und DNA.
Abwesenheit von Nukleasen: Jede Charge wird auf mehreren Substraten getestet, um die Abwesenheit von Endonuklease, Exonuklease, Ribonuklease und Nicking-Aktivität sicherzustellen.
DNA-Gehalt: ≤ 10 pg/mg Enzym (bestimmt durch den Schwellenwert)
Keimbelastung: ≤5 KBE/g (bestimmt durch den strengsten Test aus der Europäischen Pharmakopöe, der die Gesamtzahl der lebensfähigen aeroben Bakterien, Hefen und Pilze ermittelt)

Volumenaktivität: Ca. 50 U/ml Lösung (Chromozym-Assay); ca. 600 U/ml Lösung (Hämoglobin-Assay). Eine Einheit ist die Enzymaktivität, die bei +25 °C in 1 Minute 18 mmol Chromozym TRY (entspricht 600 U/ml mit dem Hämoglobin-Assay) spaltet. Spezifische Werte für die vorliegende Charge sind im Analysenzertifikat zu finden.

Aktivator: Zur Stimulierung der Proteinase-K-Aktivität können Denaturierungsmittel (SDS und Harnstoff) zugesetzt werden. SDS in einer Endkonzentration von 2 % zum Beispiel kann die Aktivität von Proteinase K erheblich steigern. Die Optimierung durch den Einsatz von Denaturierungsmitteln kann die Proteinase-Aktivität bis auf das Siebenfache steigern.

Arbeitslösung: Vorgeschlagene Puffer:
Der geeigneteste Puffer für Proteinase K ist abhängig von der Anwendung. Die Richtlinien für pH-Wert und Temperatur in der Parameterdatei sind stets zu beachten. In der Regel ist Proteinase K stabil und sehr aktiv in Puffern, die denaturierende Reagenzien, wie zum Beispiel Harnstoff, Natriumdodecylsulfat (SDS) und Guanidinium-Salze enthalten.

Inhibitoren: Das Enzym wird durch Pefabloc^® SC inaktiviert. Es wird jedoch weder durch Metallionen, Chelatbildner (z.B. EDTA), Sulfhydrylreagenzien noch durch Trypsin- oder Chymotrypsin-Inhibitoren inaktiviert.

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Zur schnellen Inaktivierung von RNasen und DNasen.
Das Enzym kann das Protein in freie Aminosäuren reduzieren, wenn es für lange Inkubationszeiten in großem Überschuss vorhanden ist.

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm