Anti-Prälamin-A-Antikörper, Klon 7G11

Lamin-A ist eine Schlüsselkomponente der Kernlamina, einem Proteinnetzwerk, das der inneren Membran zugrunde liegt und Form und Größe des Zellkerns bestimmt. Dasselbe Gen (Lmna, Dhe oder Lamn1 bei murinen Spezies, Gen-ID 16905), das Lamin-A kodiert, kodiert auch die alternativ gespleißten Prälamin-C-Isoformen (UniProt P48678-2 und P48678-3). Murines Lamin-A (UniProt P48678-1) wird anfänglich als ein 665-Aminosäuren-Prälamin-A, das in einem CAAX-Motiv endet, erzeugt. Es wird posttranslational durch vier enzymatische Schritte weiterverarbeitet, um das reife Lamin-A zu erzeugen. Die Farnesylierung von Cys662, endoproteolytische Spaltung der letzten drei Aminosäuren (A.S. 663-665), Carboxymethylierung von Cys662 und die abschließende endoproteolytische Spaltung der verbleibenden Peptidsequenz (A.S. 648-662), einschließlich der farnesylierten Cys662, wird durch die ER-Membran-Zinkmetallproteinase ZMPSTE24 katalysiert.

Klon 7G11 weist Prälamin-A unabhängig von seinem Farnesylierungsstatus nach, aber nicht reifes Lamin-A (A.S. 1-647), dem die C-terminale Propeptidsequenz fehlt. Klon 7G11 erkennt keine Prä- oder reifen Formen der gespleißten Isoformen C1 und C2 (Lamin-C; P48678-2 und P48678-3).

Epitop: C-terminale Propeptidsequenz

Lineares Peptid, das der C-terminalen Propeptidsequenz von Maus-Prälamin-A entspricht.

Dieser Anti-Prälamin-A-Antikörper, Klon 7G11 ist zur Verwendung in Western Blot und Immunfluoreszenz für den Nachweis von Prälamin-A validiert.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Forschungsunterkategorie
Adhäsion (CAM)

Western-Blot-Analyse: 0,5 µg/ml dieses Antikörpers wies die durch eine 2-tägige Behandlung mit FTI (5 µmol/l, Katalognr. 344550) eingeleitete Prälamin-A-Anreicherung in C2C12-Zelllysat nach.
Immunfluoreszenz-Analyse: Eine repräsentative Charge wies eine hochregulierte Prälamin-A-Immunreaktivität in Keratinozyten, aber nicht in Hautfibroblasten mittels Immunhistochemie unter Verwendung von Paraformaldehyd-fixierten Paraffinhautschnitten aus keratinozytenspezifischen Fntb-Knockout-Mäusen nach, während eine Prälamin-A-Hochregulation in sowohl Keratinozyten als auch Hautfibroblasten von Mäusen mit Nicht-Gewebe-/Zelltyp-spezifischem Zmpste24-Knockout festgestellt wurde (Lee, R., et al. (2010). Hum. Mol. Genet.19(8):1603-1617).
Immunfluoreszenz-Analyse: Eine repräsentative Charge färbte Kernrand von Hepatozyten durch Fluoreszenz-Immunhistochemie mit methanolfixierten und Tween-permeabilisierten Leber-Schnellschnitten von einem transgenen Mäuse-Stamm, der nur das nichtfarnesylierte C662S-Prälamin-A (nPLAO/nPLAO) und kein Lamin-C erzeugt, während die zellulären Prälamin-A-Werte in Leberschnitten von Wildtyp-Mäusen oder einem Mäuse-Stamm, der nur Wildtyp-Prälamin-A (PLAO/PLAO) und kein Lamin-C erzeugt, nicht nachweisbar war (Davies, B.S., et al. (2010). Hum. Mol. Genet. 19(13):2682-2694).
Western-Blot-Analyse: Eine repräsentative Charge wies die zelluläre Prälamin-A-Anreicherung bei einer Behandlung mit Farnesyltransferaseinhibitor (FTI) in murinen Fibroblasten nach. Klon 7G11 weist Prälamin-A selektiv nach, nicht jedoch reifes Lamin-A oder Lamin-C (Lee, R. et al. (2010). Hum. Mol. Genet.19(8):1603-1617).
Hinweis: Unter normalen Bedingungen liegen die zellulären Prälamin-A-Werte unter der Nachweisgrenze. Jedes neu erzeugte Prälamin-A wird schnell weiterverarbeitet, um reifes Lamin-A zu erzeugen. Die zelluläre Farnesyltransferase- und/oder ZMPSTE24-Aktivität muss gehemmt werden (durch Gen-Knockout oder Inhibitorbehandlung), um einen antikörperbasierten Nachweis von zellulärem Prälamin-A zu ermöglichen.

Beurteilt mittels Western Blot in RAW264.7-Zelllysat.

Western-Blot-Analyse: 0,5 µg/ml dieses Antikörpers wies die durch eine 2-tägige Behandlung mit FTI-276 (5 µmol/l, Katalognr. 344550) eingeleitete Prälamin-A-Anreicherung in murinen RAW 264.7-Makrophagen nach.

~74 kDa gemessen. Dieser Antikörper weist eine Form von Prälamin A nach, erkennt Isoform C jedoch nicht.

Aufgereinigter monoklonaler Ratten-IgG2aκ-Antikörper in Puffer mit 0,1 mol/l Tris-Glycin (pH-Wert 7,4), 150 mmol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid.

Format: Aufgereinigt

Über Protein G aufgereinigt

Bei 2–8 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

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