Anti-GAD67-Antikörper, Klon 1G10.2

Glutamat-Decarboxylase (GAD; E.C. 4.1.1.15) ist ein Enzym, das für die Umwandlung von Glutaminsäure in Gamma-Aminobuttersäure (GABA), dem wichtigsten inhibitorischen Transmitter in höheren Hirnregionen und Hemmer des mutmaßlichen parakrinen Hormons in Langerhans-Inseln, verantwortlich ist. Zwei molekulare Formen von GAD (65 kDa und 67 kDa, 64 % aa-Identität zwischen Formen) sind hoch-konserviert und beide Formen werden im ZNS, den Langerhans-Inselzellen, Hoden, Eileitern und Eierstöcken exprimiert. Die Isoformen sind zytoplasmatisch und bereichsweise im Gehirn von Ratten und Mäusen verteilt (Sheikh, 1999). Bei GAD65 handelt es sich um ein amphiphiles, membranverankertes Protein (585 a.a.), das auf dem menschlichen Chromosom 10 kodiert wird und für die vesikuläre GABA-Bildung verantwortlich ist. GAD67 ist zytoplasmisch (594 a.a.), wird auf dem Chromosom 2 kodiert und scheint zu einem beträchtlichen Teil für die zytoplasmische GABA-Bildung verantwortlich zu sein. Während der neuronalen Entwicklung ändert sich die GAD-Expression im Rückenmark von Ratten. GAD65 wird transient in Kommissuralaxonen um E13 herum exprimiert, jedoch am nächsten Tag herunterreguliert, während sich die Expression von GAD67 in den Somata dieser Neuronen größtenteils erhöht (Phelps, 1999). Bei der voll entwickelten Bauchspeicheldrüse von Ratten scheinen GAD65 und GAD67 unterschiedlich lokalisiert zu sein, GAD65 hauptsächlich in Insulin enthaltenden Beta-Zellen und GAD67 in Glucagon enthaltenden (A) Zellen (Li, 1995). Die GAD67-Expression scheint vor allem plastisch zu sein und kann sich als Reaktion auf experimentelle Manipulationen (zum Beispiel durch neuronale Stimulation oder Durchtrennung) oder Krankheitsprogression und auftretende Störungen wie Schizophrenie ändern (Volk, 2000). Die Kolokalisierung der beiden GAD-Isoforme zeigt ebenfalls Änderungen bei der GAD65/GAD67-Verteilung, die mit bestimmten Krankheitsstadien wie IDDM und SMS zusammenhängen.

Reagiert mit der 67-kDa-Isoform der von Ratte, Maus und Mensch stammenden Glutamatdecarboxylase (GAD67). Bei anderen Arten wurde dies noch nicht getestet. Beim Western Blot am Hirnzell-Lysat von Ratten wurde im Vergleich zum Blot, der mit AB1511 (der sowohl mit GAD65 als auch mit GAD67 reagiert) getestet wurde, keine Kreuzreaktivität mit GAD65 nachgewiesen.&

Rekombinantes GAD67-Protein

Dieser Anti-GAD-Antikörper, Klon 1G10.2 wird zur Verwendung bei IH, IH(P), WB für die Detektion von GAD67 validiert. Dieser Anti-GAD-Antikörper weist mehr als 75 Produktzitate auf.

Forschungskategorie
Neurowissenschaft

Forschungsunterkategorie
Neurotransmitter & Rezeptoren

Neuronen- & Gliamarker

Western Blot: Bei einer vorhergehenden Charge mit ECL am Gehirn-Lysat von Ratte und Maus wurde eine Verdünnung von 1:5.000 – 1:10.000 verwendet.

Immunhistochemie bei mit 4 % Paraformaldehyd fixiertem Gewebe von Maus und Ratte: 1:1.000 – 1:5.000. Der Antikörper wirkte auch gut bei menschlichem Gewebe, das 10 Minuten lang in 4 % PFA bei 4°C oder 100 % Ethanol bei +20°C oder 100 % Aceton bei -20°C in Verdünnungen von 1:2.500-1:5.000 fixiert wurde.
Ein polyklonaler Anti-GAD67 Antikörper ist auch als AB5992 erhältlich.

Die optimalen Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

Regelmäßig mittels Immunhistochemie durch SKNSH-Zelllysat beurteilt.

Immunhistochemische (Paraffin) Analyse:
Repräsentatives Färbungsmuster und Morphologie von GAD67 im Barrel-Feld (S1) der somatosensorischen Großhirnrinde der Maus. Alle braunen Flecken sind a-Neuronen von Lamina VI. Es war keine Epitopdemaskierung erforderlich. Diese Antikörper-Charge wurde 1:500 mit IHC-Select Detektionsreagenz mit HRP-DAB verdünnt.
Optimales Färbungsmuster/optimale Morphologie von GAD67: Gehirn der Maus.

67 kDa

Ersetzt: AB5992; AB5862P

Aufgereinigter monoklonaler IgG2a der Maus in Puffer mit 0,1 % Natriumazid

Aufgereinigtes Protein A

Format: Aufgereinigt

Bei 2 – 8ºC 6 Monate in unverdünnten Aliquoten ab Empfangsdatum haltbar.

Kontrolle
SKNSH-Zell-Lysat (menschliches Neuroblastom), Großhirnrinde der Maus.

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