Fibrin-In-Vitro-Angiogenese-Assay

Einführung

Die Angiogenese ist der Prozess der Erzeugung neuer Kapillarblutgefäße. Sie ist ein grundlegender Bestandteil einer Reihe normaler (Reproduktion und Wundheilung) und pathologischer Prozesse (diabetische Retinopathie, rheumatoide Arthritis, Tumorwachstum und Metastasen).1

Das CHEMICON-Fibringel-In-vitro-Angiogenese-Assay-Kit bietet ein praktisches System zur Beurteilung der Tubenbildung durch Endothelzellen in 96-Well- oder anderen Formaten. Bei Kultivierung auf oder in einem Fibringel bilden Endothelzellen schnell miteinander verbundene Netzwerke, in denen offene Lumina sichtbar werden können.2,3 Diese Tubenbildung ist ein mehrstufiger Prozess von Zelladhäsion, Migration, Differenzierung und Wachstum.4 Die Bildung interzellulärer Verbindungen und Lumina innerhalb von Endothelzellnetzen in Fibringelen hängt von den Aktionen der Integrine VE-Cadherin, avb3 und a5b1, der cdc42- und Rac1-GTPasen sowie der Matrix-Metalloproteinasen des Membrantyps (MT-MMPs) 2,3,5,6 ab. Die Angiogenese innerhalb der Fibringele in vitro wird als genaues Modell für die Wundheilung und Tumorangiogenese angesehen, da der von Tumorzellen abgeleitete vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor/vaskuläre Permeabilitätsfaktor das Austreten von Fibrinogen aus den Tumorgefäßen und die Bildung einer fibrinreichen proangiogenen provisorischen Matrix fördert.7

Die Fibringelbildung wird durch die enzymatische Spaltung des Fibrinogens, eines Heterotrimers, durch Thrombin eingeleitet.8 Die daraus resultierenden gespalteten Fibrinmoleküle bilden regelmäßige, multimolekulare Anordnungen, die hochtransluzent sind. Die Konzentrationen und Formulierungen von Fibrinogen und Thrombin in diesem Kit sind für eine maximale Tubenbildung durch HUVEC und eine einfache Visualisierung dieser Tuben optimiert.

Anwendung

Das CHEMICON-Fibringel-In-vitro-Angiogenese-Assay-Kit stellt ein einfaches Modell der Angiogenese dar, bei dem die Induktion oder Hemmung der Tubenbildung durch exogene Signale auf einfache Weise überwacht werden kann. Fibringele können durch Mischen von Fibrinogen- und Thrombin-Lösungen schnell und einfach in Kulturschalen gebildet werden. Zum Testen von Inhibitoren oder Stimulatoren der Tubenbildung wird die Endothelzellsuspension einfach mit verschiedenen Konzentrationen des zu testenden Inhibitors oder Stimulators vorgemischt, bevor die Zellen auf die Oberseite des Fibringels gegeben werden. Die Zugabe einer zweiten Fibringelschicht am Tag nach der Zellplattierung ist optional, fördert aber das optimale Überleben und einen höheren Grad an Netz- und Lumenbildung. Mit dem Assay kann der Umfang der Tubenbildung in verschiedenen Endothelzellen, z. B. humanen Zellen aus der Nabelschnurvene (HUVEC) oder kapillaren Endothelzellen vom Rind (BCE), überwacht werden.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Fibrinogen-Lösung: (Art.-Nr. 90244) Eine 10-ml-Flasche.

Thrombin-Lösung: (Art.-Nr. 90246) Eine 7,5-ml-Flasche.

100facher Angiogenzusatz für Positivkontrollen: (Art.-Nr. 90247) Ein 0,5-ml-Fläschchen. (Enthält 1,0 mg/ml Insulin aus Rinderpankreas, 0,55 mg/ml humanes Transferrin (im Wesentlichen eisenfrei) und 0,5 μg/ml Natriumselenit in EBSS ohne Phenolrot).

Ungeöffnete Kitmaterialien bis zum Verfallsdatum bei -20 °C oder -70 °C aufbewahren. Nach dem Auftauen der Fibrinogen-Lösung bis zu zwei Wochen bei Raumtemperatur aufbewahren. Nach dem Auftauen kann das Basalmedium bis zu einem Monat bei 4 ºC aufbewahrt werden. Der aufgetaute 100fache positive Angiogen-Kontrollzusatz kann bei 4 ºC bis zu einem Jahr aufbewahrt werden.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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