TMB, löslich

Erzeugt ein gelbes, lösliches Endprodukt, das bei 370 nm bis 650 nm interpretiert werden kann. Die Verwendung von Stopplösung erhöht die Empfindlichkeit um das Zwei- bis Vierfache und führt zu einer gelben Lösung, die bei 450 nm abgelesen werden kann.

Lösliches TMB-Substrat, das als Einkomponentensystem geliefert wird.

Toxizität: Reizstoff (B)

Einkomponentensystem mit 1,46 mM TMB, 2,21 mM H₂O₂ in einem proprietären Lösungsmittel, pH 3,1 ± 0,5.

Vor direkter Sonneneinstrahlung schützen. Verwerfen, wenn die Lösung blau oder trüb wird. Das Reagenz ist bei Raumtemperatur stabil, wir empfehlen jedoch, es im Kühlschrank aufzubewahren, um die Haltbarkeit zu verlängern. Vor der Verwendung auf Prüftemperatur erwärmen.

Das Produkt wurde auf seine Stabilität bei 4 °C und 18–26 °C getestet. Die Produktleistung wird am Endprodukt mittels ELISA getestet.



Empfohlenes Verfahren für die Verwendung von TMB in HRP-basierten ELISAs:



1. Führen Sie alle erforderlichen Inkubationen mit Antikörpern und HRP-markierten Sonden durch.

2. Waschen Sie die Plattenvertiefungen mindestens viermal mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) oder trisgepufferter Kochsalzlösung (TBS), die 0,1 % Tween^®-20 als Detergens enthält.

3. Nach dem letzten Waschvorgang schütteln und alle Pufferreste aus den Vertiefungen abtupfen.

4. 100 μl TMB-Lösung in jede Vertiefung geben und 5–30 Minuten inkubieren.

5. Optionen für Messungen:

a. Bei kinetischen Assays kann die Reaktion als Funktion der Zeit überwacht werden, indem die Absorption bei 650 nm in Zwischenintervallen gemessen wird.

b. Bei Endpunkt-Assays, bei denen das blaue Chromogen erhalten bleibt, sollte die Reaktion durch Zugabe von 100 µl 0,1 % Natriumfluorid (NaF) gestoppt und die Absorption bei 650 nm abgelesen werden.

c. Wird für Endpunkt-Assays eine höhere Empfindlichkeit gewünscht, sollte die Reaktion durch Zugabe von 100 μl entweder 500 mM H₂SO₄ oder 250 mM HCl gestoppt und die Absorption bei 450 nm INNERHALB VON 5 MIN. abgelesen werden. Durch Zugabe von Säure wird das blaue Radikal in das gelbe Diimin umgewandelt, das bei 450 nm absorbiert.



HINWEIS: Die optimale Inkubationszeit hängt von der Menge des vorhandenen HRP ab. Wenn sich die Farbe zu schnell entwickelt, ist die Kinetik nullter Ordnung nicht mehr gegeben. Eine Verdünnung der Sonde, des Antikörpers oder des HRP-markierten Reagenzes kann erforderlich sein. Schwankungen bei Zeit, Reagenzienvolumen und Temperatur können ebenfalls eine weitere Standardisierung durch den Anwender erfordern.

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC