539790
ProteoExtract® Kit für die subzelluläre Proteom-Extraktion
Synonym(e):
S-PEK-Kit
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
Alle Fotos(1)
About This Item
UNSPSC-Code:
41106500
Empfohlene Produkte
Verwendung
sufficient for 20 extractions
Hersteller/Markenname
Calbiochem®
Lagerbedingungen
OK to freeze
avoid repeated freeze/thaw cycles
Methode(n)
fractionation: suitable
Aufnahme
sample type: mammalian tissue(s)
sample type: mammalian cultured cells
Versandbedingung
ambient
Lagertemp.
2-8°C
Verwandte Kategorien
Allgemeine Beschreibung
Schnelle und reproduzierbare Extraktion subzellulärer Proteome aus Säugetierzellen
Das ProteoExtract®-Kit für die subzelluläre Proteomextraktion (S-PEK) ist für die schnelle und reproduzierbare Extraktion subzellulärer Proteome aus adhärenten und in Suspension angezogenen Säugetierzellen vorgesehen. Das S-PEK macht sich die unterschiedlichen Löslichkeiten bestimmter subzellulärer Kompartimente in den vier ausgewählten Reagenzien zunutze. Bei adhärenten Zellen wird das Verfahren direkt in der Gewebekulturschale durchgeführt, ohne die Zellen zuvor entnehmen zu müssen. Die Zellen bzw. ihre Bestandteile haften während der sequenziellen Extraktion der subzellulären Kompartimente so lange weiter an der Schale an, bis das für sie geeignete Extraktionsreagenz eingesetzt wird. So wird eine frühzeitige Zerstörung der Zellstruktur durch die enzymatische oder mechanische Ablösung der Zellen von der Gewebekulturschale und das damit verbundene Durchmischen verschiedener subzellulärer Kompartimente vermieden. Bei in Suspension angezogenen Zellen beginnt die Extraktion mit der vorsichtigen Sedimentierung und dem Waschen der Zellen. Die schrittweise Extraktion liefert vier separate Proteinfraktionen aus einer einzigen Probe:
Probengröße: 3–5 x 106 oder 25–50 mg Gewebe.
Das ProteoExtract®-Kit für die subzelluläre Proteomextraktion (S-PEK) ist für die schnelle und reproduzierbare Extraktion subzellulärer Proteome aus adhärenten und in Suspension angezogenen Säugetierzellen vorgesehen. Das S-PEK macht sich die unterschiedlichen Löslichkeiten bestimmter subzellulärer Kompartimente in den vier ausgewählten Reagenzien zunutze. Bei adhärenten Zellen wird das Verfahren direkt in der Gewebekulturschale durchgeführt, ohne die Zellen zuvor entnehmen zu müssen. Die Zellen bzw. ihre Bestandteile haften während der sequenziellen Extraktion der subzellulären Kompartimente so lange weiter an der Schale an, bis das für sie geeignete Extraktionsreagenz eingesetzt wird. So wird eine frühzeitige Zerstörung der Zellstruktur durch die enzymatische oder mechanische Ablösung der Zellen von der Gewebekulturschale und das damit verbundene Durchmischen verschiedener subzellulärer Kompartimente vermieden. Bei in Suspension angezogenen Zellen beginnt die Extraktion mit der vorsichtigen Sedimentierung und dem Waschen der Zellen. Die schrittweise Extraktion liefert vier separate Proteinfraktionen aus einer einzigen Probe:
- Zytosolfraktion (F1)
- Membran-/Organellenproteinfraktion (F2)
- Zellkernproteinfraktion (F3)
- Zytoskelettfraktion (F4)
Probengröße: 3–5 x 106 oder 25–50 mg Gewebe.
Leistungsmerkmale und Vorteile
- Schrittweise Extraktion liefert vier getrennte subzelluläre Proteome aus einer Probe
- Hoch reproduzierbar
- Keine Ultrazentrifugationsschritte
- Schnell—in nur 2 Stunden, einschließlich 45 Minuten Arbeitszeit
- Liefert für Funktionsstudien geeignete Proteine
Komponenten
Waschpuffer, Extraktionspuffer I, Extraktionspuffer II, Extraktionspuffer III, Extraktionspuffer IV, Proteaseinhibitoren-Cocktail, Benzonase® Nuklease (Bestell- Nr. 71206) und eine Anwendervorschrift.
Warnhinweis
Toxizität: Mehrere Toxizitätswerte, siehe MSDS (O)
Prinzip
Das Calbiochem ProteoExtract-Kit für die subzelluläre Proteomextraktion ist für die subzelluläre Extraktion von Säugetierproteinen aus folgenden Quellen vorgesehen: Zytosol-, Organellen- und Membran-, Zellkern- und Zytoskelettfraktionen adhärenter Gewebekulturzellen, suspendierte Gewebekulturzellen, gefrorene Zellpellets und fragmentiertes Gewebe.
Angaben zur Herstellung
Für eine Extraktion erforderliche Kit-Komponenten
Das Volumen jeder Komponente, die für eine subzelluläre Extraktion erforderlich ist, hängt von der Menge des Ausgangsmaterials ab.
Das Volumen jeder Komponente, die für eine subzelluläre Extraktion erforderlich ist, hängt von der Menge des Ausgangsmaterials ab.
Geeignete Probenarten sind unter anderem:
- Adhärente Gewebekulturzellen
- Suspensionsgezüchtete Gewebekulturzellen
- Gefrorene Zellpellets
- Fragmentiertes Gewebe
Lagerung und Haltbarkeit
Vor der Durchführung der Extraktion müssen alle gefrorenen Puffer bei Raumtemperatur aufgetaut werden. Ein Wasserbad mit 25 °C kann den Auftauvorgang unterstützen. Nach dem Auftauen die Puffer durch sanftes Schütteln oder Vortexen gut mischen.
Sonstige Hinweise
Zhang, L., und Insel, P. A. 2004. J. Biol. Chem.279, 20858.
Yuan, X., et al. 2002. Electrophoresis23, 1185.
Butcher, et al. 2001. J. Immunol.167, 2193.
Ott, et al. 2001. Pharmacogenomics J.1, 142.
Allen, L. 2000. Nature405, 819.
Dunn, M. J. 2000. Electrophoresis 6.
Rabilloud, T. 2000. Two-dimensional Gel Electrophoresis and Identification Methods Springer-Verlag
Mejdoubi, et al. 1999. Biochem. Biophys. Res. Comm.254, 93.
Reymond, et al. 1997. Electrophoresis18, 2842.
Laemmli, U. K. 1970. Nature227, 680.
Lowry, et al. 1951. J. Biol. Chem.193, 265.
http://www.expasy.ch/ und http://www.expasy.proteome.org.au
Yuan, X., et al. 2002. Electrophoresis23, 1185.
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Ott, et al. 2001. Pharmacogenomics J.1, 142.
Allen, L. 2000. Nature405, 819.
Dunn, M. J. 2000. Electrophoresis 6.
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Laemmli, U. K. 1970. Nature227, 680.
Lowry, et al. 1951. J. Biol. Chem.193, 265.
http://www.expasy.ch/ und http://www.expasy.proteome.org.au
Rechtliche Hinweise
Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PROTEOEXTRACT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
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