MILLIPLEX^® Akt/mTOR Phosphoprotein Magnetic Bead 11-Plex Kit – Multiplex-Zellsignalisierungsassay

Der Akt-Signalweg, einer der am häufigsten dysregulierten Signalwege bei Krebs, spielt eine wichtige Rolle bei der Vermittlung eines sehr breiten Spektrums zellulärer Prozesse wie Wachstum und Entwicklung, Zellzyklus, Energiehomöostase und Zellüberleben. Akt, eine Serin/Threonin-Kinase, die über 100 Proteinsubstrate phosphoryliert und Signale für das Zellüberleben und die Zellproliferation vermittelt, ist in verschiedenen Tumorarten häufig selbst hyperphosphoryliert. Obwohl nicht bekannt ist, dass bei Krebserkrankungen das Akt-Gen selbst mutiert ist, sind viele der vorgeschalteten Regulatoren von Akt, einschließlich IR, IRS, PI3K und PTEN, Onkogene und Tumorsuppressoren. Der mTOR-Komplex (mammalian Target Of Rapamycin), der Akt nachgeschaltet ist, ist ein wichtiger Regulator des Wachstums und des Stoffwechsels. Da fast alle Akteure des Akt/mTOR-Signalwegs koordiniert durch Phosphorylierung reguliert werden, ist es notwendig, den Phosphorylierungsstatus mehrerer Proteinziele gleichzeitig zu messen, um die Rolle dieses Signalwegs bei normalen physiologischen Prozessen und bei Krankheiten wie Krebs und Diabetes verstehen zu können.

Die Kreuzreaktivität zwischen den Antikörpern und allen anderen Analyten in diesem Panel ist nicht nachweisbar oder vernachlässigbar.

Intrazelluläre Multiplex-Assays auf Bead-Basis mit Luminex-Technologie ermöglichen die gleichzeitige relative Quantifizierung von mehreren Phosphorylierungs- und Gesamtsignalwegproteinen in Gewebe- und Zelllysatproben. Die Multiplexing-Ergebnisse mit denen des Western Blotting vergleichen.

Für beste Ergebnisse wird eine Inkubation über Nacht (4 °C) empfohlen.
Für diesen Test werden 25 μ;l verdünntes Zelllysat pro Well benötigt.
Dieses Kit muss mit Assay-Puffer 2 (im Lieferumfang enthalten) verwendet werden.
Der empfohlene Arbeitsbereich der Proteinkonzentration für den Test liegt bei 15 bis 150 ng Gesamtprotein/Well (25 μ;l/Well bei 600 bis 6.000 ng/ml).

Verfügbare Analyten:

• Akt (Ser473)
• GSK3α; (Ser21)
• GSK3β; (Ser9)
• IGF1R (Tyr1135/Tyr1136)
• IR (Tyr1162/Tyr1163)
• IRS1 (Ser636)
• mTOR (Ser2448)
• p70S6K (Thr412)
• PTEN (Ser380)
• RPS6 (Ser235/Ser236)
• TSC2 (Ser939)

96-Well-Platte

Die empfohlene Lagertemperatur für die Kitkomponenten ist 2–8 °C.

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