ChIPAb+-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation
validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen.
Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten. Das ChIPAb+-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Set enthält den Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und qPCR-Primer, die eine 139-bp-Region des humanen alpha-Satelliten amplifizieren. Das Trimethyl-Histon H3 (Lys27) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Die Methylierung von Histonen kann an zwei verschiedenen Resten erfolgen: Arginin oder Lysin. Die Histon-Methylierung kann, abhängig vom methylierten Rest, mit einer Transkriptionsaktivierung oder -unterdrückung in Zusammenhang stehen. Lysin 27 von Histon H3 kann durch verschiedene Histon-Methyltransferasen wie EZH2 oder NSD3 mono-, di- oder trimethyliert werden (Histon H3-Monomethyl-Lys27, Histon H3-Dimethyl-Lys27 oder Histon H3-Trimethyl-Lys27). Die Methylierung dieses Rests ist primär mit der Transkriptionsunterdrückung assoziiert.

Eine weitreichende artenübergreifende Kreuzreaktivität ist zu erwarten.

Trimethyl-Histon H3 (Lys27)

Epitop: Trimethyl-Lys27

KLH-konjugiertes, synthetisches, zweifach verzweigtes Peptid, das die Sequenz ...AR(me3K)SAP... enthält, wobei me3K dem Trimethyl-Lysin an Rest 27 von humanem Histon H3 entspricht.

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 2 x 10⁶ HeLa-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für GAPDH, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und Primern, die auf den Promotor für humanes MyoD abzielen, verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für das EZ-Magna ChiP A Kit (Katalognr. 17-408) oder das EZ-ChIP Kit (Katalognr. 17-371).

Western-Blot-Analyse:
Rekombinantes Histon H3 (Bahn 2) und HeLa-Zellsäureextrakte (Bahn 1) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit einer 1:5000-Verdünnung von Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) (0,4 μg/ml) untersucht.
Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht (siehe Abbildungen).

Durch ChIP validiertes Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper- und Primer-Set, einschließlich Antikörper in ChIP-Qualität und spezifische Kontroll-PCR-Primer für die Chromatin-Immunpräzipitation von H3K27Me3.

Forschungs-Unterkategorie
Histone

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

25 Assays je Kit, ~4 μl je Chromatin-Immunpräzipitation.

Polyklonaler Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper, 1 Fläschchen

Polyklonales Kaninchenserum als Kontrolle, 1 Fläschchen

Humaner alpha-Satellit-Primer-Set, 1 Fläschchen

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 3 x 10⁶ NIH/3T3-L1-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP^® A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten
DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für den humanen alpha-Satellit verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna ChIP A (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

17 kDa

Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) (polyklonales Kaninchen-IgG). Ein Fläschchen mit 100 μg mit Protein A aufgereinigtem IgG in 100 μl Puffer mit 0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl, 0,05 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

ChIP-Primer für den humanen alpha-Satellit. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen alpha-Satellit. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Bei -20 °C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar

Kontrolle
Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen alpha-Satellit. Bei -20 °C aufbewahren.

FÜR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC

REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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